تقنية الإطاحة بالجين Gene Knockout Technology

أحد التقنيات الوراثية التي يتم بواسطتها هندسة الكائن الحي ليحمل جين غير فعال اي ان الجين قد أطيح به ، وعادة تتم الهندسة لأغراض بحثية ويعرف الكائن بالكائن المطاح به Knockout Organism وتختصر الى(Knockouts (KO ويتم استخدام مثل هذه الكائنات للتعرف على وظائف الجينات التي تم تحديد توالينيوكليوتيداتها ولكن دون معرفة وظيفتها بشكل متكامل او بشكل جزئي وذلك بالمقارنة بين الأحياء المطاح بجيناتها والأحياء الطبيعية .
ويستعمل المصطلح او التقنية للحصول على كائنات حذف منها الجين بالكامل ويستوجب إزالة الجين في الأحياء حقيقية النواة ثنائية المجموعة الكروموسومية إزالة نسختي الجين .
والكائنات التي أطيح باثنين من جيناتها تسمى الأحياء المطاح بها المضاعفة DKO) Double Knockout) ، واذا أطيح بثلاث جينات تكون TKO) Triple Knockout) واذا بأربع جينات QKO) Quadruple Knockout) وهكذا . والتقنية تعاكس تقنية Gene Knock-in .
وتتم عملية الإطاحة بالجين باستعمال عدة تقنيات ، وتستهدف بشكل خاص إنتاج حيوانات محورة وراثياً وتبدأ باستعمال الخلايا الجذعية الجنينية ثم تنقل الخلايا الجنينية المحورة الى أجنة في المراحل الأولى اي ان الحيوانات الناتجة تكون حاملة لمتغايرات وراثية في خلايا Germ Line والتي يمكن ان تنقلها الى الأجيال القادمة . ويكون ذلك باستعمال توالي محدد من الجين نفسه والذي يمكن ان يدس في الجين بسهولة (لتشابه التواليات) ، والتوالي المدخل سيؤدي الى اضطراب الجين ، والجين المضطرب لا يستطيع ان ينتسخ ويترجم او انه ينتسخ ويترجم الى بروتينات غير فعالة .
ويمكن ان تكون عملية الإطاحة مشروطة ويكون ذلك بإدخال توالي قصير يدعى lox P في المنطقة حول الجين المراد الإطاحة به ويكون إدخالها عادة في الخلايا الجرثومية ثم يتم تضريب الخلايا الناتجة مع خلايا تحمل الإنزيمات التي تقوم بعملية التأشب او إعادة الترتيب Cre-Lox recombination (وهو إنزيم بكتري الذي يستطيع ان يميز التواليات المدخلة (lox P ) ويقوم بربطها وحذف الجين الذي يوجد بينها .