عزل المسببات المرضية الفطرية

1. طريقة وضع الأنسجة في أطباق البيئة:

1- يتم غسل الأجزاء النباتية المتسخة بالماء الجار (الجذور).

2- يعقم البنش بقطعة صغير من القطن مبللة بمحلول هيبوكلوريت الصوديوم (محلول الكلوركس 10%) أو بواسطة 15% من كحول ايثانول.

3- يفتح الغاز وإشعال اللهب (موقد بنزن).

4- تقطع البقع (العينة المرضية) مع قليل من النسيج السليم حولها إلي قطع صغير تتراوح من 2-4 مم.

5- توضع القطع الصغير (نصفها من النسيج المريض والنصف الأخر من النسيج السليم) في طبق بتري يحتوي على محلول كلوركس بتركيز 10% لمدة تتراوح من 2-3 دقائق أو أكثر، ويتوف ذلك على نوع وعمر النسيج النباتي بادرات صغير العمر أو نباتات كبير - نباتات حولية أو أشجار خشبية.

6- يتم نقل القطع الصغير بواسطة ملقط معقم (يتم تعريض طرف الملقط فوق اللهب لدرجة الاحمرار ثم يغمس في كحول ايثانول 10% ثم يعرض للهب مر اخرى) ثم تأخذ قطعة النسيج النباتي وتنقل إلي ورق ترشيح للتخلص من الزائد من محلول الكلوركس أو تنقل إلي طبق بتر يحتوى على ماء معقم ثم إلي ورق الترشيح.

7- تنقل قطع النسيج النباتي من ورق الترشيح بعد التخلص من الزائد من محلول الكلوركس بواسطة ملقط معقم إلي أطباق بتر تحتوي على بيئة PDA حيث يوضع 4 قطع لكل طبق بتري وتكون كل قطعة بالقرب من حافة الطبق.

8- تنقل الأطباق في الحضان على درجة حرار 26-27م وتوضع مقلوبة ويفضل وضعها داخل كيس بلاستيك أو لف الطبق بواسطة البارافيلم لمنع تلوثها بواسطة الحلم.

2. الغرف الرطبة:

بعض الفطريات التي تصيب المجموع الخضر أو الأجزاء النباتية الموجود فوق سطح التربة يمكن عزلها باستعمال الغرف الرطبة حيث تشجع الفطريات على التجرثم وهي طريقة سريعة لتعرف على المسبب المرضي في خلال من 1-2 يوم.

1- يوضع في طبق بتر معقم ورق ترشيح مقاس 9سم ثم تضاف قليل من الماء المعقم تكفي لتبلل ورقة الترشيح.

2- توضع الأجزاء النباتية في الطبق الذي يحتوي على ورق ترشيح مبلل وتحضن الأطباق على البنش أو الضوء لمد 1-3 أيام.

3- يتم فحص الجراثيم لتعرف على المسبب المرضي أو تلقط الجراثيم بواسطة إبرة معقمة وتضع في طبق يحتوي على بيئة اجار البطاطس والدكستروز وتحضن في الحضان لمد من 5-7 أيام ثم تفحص الجراثيم بواسطة المجهر الضوئي.

المصدر

يونس يوسف مولان و صلاح الدين الحسيني محمد و ياسر عيد إبراهيم (2008) تشخيص الأمراض الفطرية وطرق مكافحتها.