نظراً للأهمية العلاجية للبرومهكسـين فقد تعددت الطرائق لتقديـره, سـواء كـان لوحده أو مع مواد أُخرى قد تكون مشـتركة معه أو متداخلة في المسـتحضرات الصيدلانية وقد نشطت البحوث في هذا المجال في سبعينيات وثمانينيات القرن الماضي بشكلٍ خاص. ويمكن تقسيم طرائق تقدير البرومهكسين بشكل أساسي إلى طرائق طيفية وطرائق كروماتوغرافية علماً بأن الطريقة القياسية لتقدير البرومهكسين والمثبتة في دساتير الأدوية هي طريقة التسحيحات المجهادية^[1].

-1  الطرائق الطيفية      Spectrophotometric Methods

      تشمل هذه الطرائق تقدير البرومهكسين لوحده باستخدام مطيافية الأشعة فوق البنفسجية (UV) أو بتفاعله مع كواشف معينة وقياس الإمتصاصية للناتج الملون في منطقة الأشعة المرئية, فقد قام الباحث دي سيورانا (De Ciurana) وجماعته^[2] بدراســة طيفيـة لتقـدير البرومهكسين والبنزايدامين (Benzydamine) في المحاليل المائية وباستخدام مطيافية الأشعة فوق البنفسجية, وكانت دقة الطريقة (±3.5%) من دون حدوث تداخل بين المركبين. وكانت الطرق الطيفية في المنطقة المرئية متنوعة, لوجود مجموعة الأمين الأروماتية في البرومهكسين مما يؤهله لتكوين قواعد شيف أو أملاح الدايازونيوم القابلة للاقتران مع عوامل عدة, أو تكوين مركبات ملونة أخرى, فقد قام الباحث جايناني (Chainani) وجماعته^[3] بتقدير البرومهكسين في المستحضرات الصيدلانية بطريقة لونية مستندة على الازدواج مع المركب بارا-ثنائي مثيل أمينو بنزالديهايد (DAB) في وسط عالي الحامضية لإعطاء قاعدة شيف ذات اللون الأصفر وامتصاصية عند طول موجي (425nm), وكانت النماذج مستقرة لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة وتخضع لقانون بير-لامبرت (Beer-Lambart) في مدى (2-16μg/mL) والاسترداد بحدود (100%), والطريقة كانت دقيقة وقابلة للإعادة وبسيطة. وقامت الباحثة دياز (Dias) وجماعتها^[4] بتقدير البرومهكسين طيفياً بنظام الضخ المستمر–المتعدد (Multi-pumping flow system) والطريقة مستندة على تفاعل البرومهكسين مع (3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone) والـ (Ce(IV)) باستخدام عدة مضخات لولبية دقيقة متشعبة واستخدام أسلوب الدفع النبضي لهذه المضخات, الذي يضمن المزج الجيد ويحسن تجانس منطقة التفاعل, وكان منحني المعايرة خطياً حيث (r>0.995,n=6) لتركيز البرومهكسين (400mg/L) وكانت حدود الكشف (2mg/L) وسرعة تقدير النماذج بحدود (45) نموذجاً لكل ساعة, وكان الانحراف القياسي النسبي أقل من (15%).

      أما طرائق تكوين أملاح الدايازونيوم (Diazotization) فهي تقوم على تفاعل البرومهكسين مع (NaNO₂) في الوسط الحامضي لإعطاء ملح الدايازونيوم الذي يتم إقترانه فيما بعد مع مركب آخر لإعطاء ناتج ملون, ثم قياس الإمتصاصية لهذا الناتج, وهناك بحوث عدة في هذا المجال تتنوع بتنوع عامل الأقتران, من ذلك ما قام به الباحثان إمانويل وماثيو (Emmanuel & Mathew)^[5] من أزدواج ملح الدايازونيوم للبرومهكسين مع الأورسينول في الوسط القاعدي, وأعطى مباشرةً لوناً مستقراً لأكثر من (3) ساعات في درجة حرارة الغرفة, وأعطى أعلى إمتصاصية عند طول موجي (435nm), وكان اللون يخضع لقانون بير في مدى (1-7μg/mL) وكانت قيمة الإسترداد للمستحضرات الصيدلانية بحدود (100%). وقد أستخدمت عوامــل إقتـران أخـرى؛ (Caticol), (Resorcinol), (β-naphthol)^[6], و(N-(1-naphthyl) ethylenediamine) ^[8,7], إذ كانت قيمة الإسترداد للتطبيقات أعلاه (98.5-100.2%), والإنحراف القياسي بين (0.28-5.2%), وحدود الكشـف تتراوح بين (1.5-65μg/mL).

      وبعيداً عن أملاح الدايازونيوم, فإن هنالك طرائق طيفية أُخرى لتقدير البرومهكسين في المستحضرات الصيدلانية, مثل تكوين مزدوج أيوني أرجواني مع البروموكريسول (Bromocresol) يسـتخلص وتقاس الامتصاصية له عند طول موجي (400-410nm)^[9], أو مفاعلته مع كاشف (حامض الستريك – انهيدريد الخليك) وقياس الامتصاصية عند (600nm) مع استرداد (99.8-101.8%) وانحراف قياسي نسبي (0.78-1.7%)^[10]. وتم تقدير البرومهكسين بطريقة طيفية حساسة وبسيطة معتمدة على التفاعل مع روز بنغال (Rose bengal) في وسط من حامض الكبريتيك لإعطاء كروموجين وردي اللون يعطي أعلى إمتصاصية عند طول مـوجي (570 nm) وكان هذا الكروموجين مسـتقراً لمدة سـاعة كاملة ويخضع لقانون بير في مدى التركيز (2-16 µg/ml)^[11]. وفي هذه الدراسة تم تطوير طريقة جايناني وذلك عن طريق إضافة الـ (SDS) لزيادة الحساسية بمقدار (4.9) أضعاف.

-2 الطرائق الكروماتوغرافية  Chromatographic Methods     

      تتنوع الطرائق الكروماتوغرافية لتقدير البرومهكسين بتنوع التقنية وتنوع الأوساط والأطوار المسـتخدمة, مثال على ذلك ما قام به الباحثان بيكارد ونيلســن (Bechgaard & Neilsen)^[12] إذ درسا تقدير البرومهكسين في الأنسان في البلازما والإدرار بواسطة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) إذ تم عزل البرومهكسين من البلازما والإدرار بواسطة مذيب (السايكلوهكسان–ثنائي أثيل أمين), وكان المحلول القياسي الداخلي هو الأميتريبتايلين (Amitriptyline) الذي يثبت في العمود مع (μBondapak C₁₈) و(0.01M) من (MeCN-MeOH) ومحلول منظم من الفوسفات (pH=7) كطور متحرك, مع استخدام مطيافية (UV) عند طول موجي (254nm) وكانت العلاقة خطية لمدى التركيز مع إنحراف قياسي نسبي (6-13%) و (3-8%) للبلازما والإدرار على التوالي وحدود الكشف كانت (10nm/L) و (5nm/L) في البلازما والإدرار على التوالي, والاسترداد كان (60%) للبلازما و (100%) للإدرار. وقام الباحث ماسودا (Masuda) وجماعته^[13] بالتقدير المتزامن لمكونات تسعة أدوية مضادة لأعراض البرد من بينها البرومهكسين بواسطة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء-المتدرج (Gradient HPLC) إذ تم فصل وتقدير هذه المكونات بشكل كامل بتغيير نسبة (water-acetonitrile) من (95:5) إلى (1:1) كطور متحرك يحتوي على (0.1%) من حامض الفوسفوريك و (0.08w/v%) من (heptansulfonate) بواسطة برنامج التدرج الخطي, وقت التحليل كان بحدود (40) دقيقة, ووقت البدء كان بحدود (15) دقيقة والإستعادة كانت جيدة لكل مكون.

      وطور الباحث راو (Rao) وجماعته^[14] طريقة تقدير البرومهكسين وكبريتات السالبيوتامول (Salbutamol sulfate) في نماذج جرعات مشتركة باستخدام طريقة كروماتوكرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) معكوس الطور للأيون المزدوج مستندة على استخدام عمود من (μBondapak Ph) مع طور متحرك من (MeOH-H₂O) بنسبة (75:25), يحتوي على (0.005M) من حامض بنتان سلفونيك وحامض سلفانيليك كقياسي داخلي, وتم الكشف باستخدام الـ (UV) عند طول موجي (280nm) وكانت نسبة الاسترداد (98.5-100.3%) للبرومهكسين ولا يحدث تداخل للمادة الأخرى ولم يلاحظ حدوث تداخلات للمضافات الشائعة التي تضاف على الأدوية. كذلك استخدم الباحثان كانالز وكالديـرو (Canals & Caldero)^[15] تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) لتقدير البرومهكسين وبعض أدوية السلفا حيث كانت الطريقة سريعة تستغرق (7) دقائق مع دقة أكثر من (2%), وطبقت على مستحضرات مختلفة لهذه الأدوية. كما استخدمت كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (Thin Layer Chromatography TLC) مع جل السليكا (Silica gel) بالإشتراك مع طريقة أوراق إستبدال الأيون (Ion Exchange Papers) في إستخلاص وتشخيص الأدوية في الأوساط السائلة بما فيها البرومهكسين حيث عزلت من المحاليل المالحة والإدرار, واستخدم جل السليكا في الكروماتوغرافيا وتم الكشف باستخدام مطيافية الـ (UV)^[16]. وهناك دراسات أُخرى لتقدير البرومهكسين باستخدام تقنية الكروماتوغرافيا وبأنواعها المختلفة أو باشتراكها مع غيرها من الطرق التحليلية^[18,17].

-------------------------------------------------

1- "British Pharmacopoeia" on CD, 3^rd Ed., System Simulation Ltd, The Stationary Office, London (2000).                                                            

2-  R. P. De Ciurana and V. Vilas Sanchez, Circ. Farm., 30, 237, 433-442  (1973); Chem. Abst., 78, 164175x (1973).

3- . M. L. Chainani, A. M. Nighojkar and S. D. Naik, Indian Drugs, 24, 1,  51-53 (1986); Chem. Abst., 106, 107977h (1987).

4- A. C. B. Dias, J. L. M. Santos, J. L. F. Lima and E. A. G. Zagatto, Anal. Chem. Acta, 499, 1, 107-114 (2003); (Abstract).

5-  J. Emmanuel and R. Mathew, Indian Drugs, 22, 7, 387-388 (1985);  Chem. Abst., 103, 129154c (1985).

6- S. S. Zarapker, R. V. Rele and V. J. Doshi, Indian Drugs, 26, 1, 38-41  (1988); Chem. Abst., 110, 63831g (1989).

7- M. D. Shingbal and V. R. Rao, Indian Drugs, 22, 5, 275-276 (1985);  Chem. Abst., 103, 92947k (1985).

8- B. Gala, A. Gomezhens and D. Perezbendito, Anal. Letters., 26, 12,  2607-2617 (1993); (Abstract).

9-  W. J. Bowtle, A. P. Prince and D. J. Mortimer, Analyst, 106, 478-481  (1981).        

10-  D. M. Shingbal and R. R. Naik, Indian Drugs, 22, 11, 600-601 (1985);  Chem. Abst., 104, 10729z (1986).   

11-  S. K. Babu, P. A. V. Ganapathi, N. V. S. N. Raju and G. M. Kumar,   East. Pharm., 42, 493, 135-136 (1999); Chem. Abst., 130, 316726k  (1999).

12-  E. Bechgaard and A. Neilsen, J. Chromatogr., 228, 392-397 (1982);  Chem. Abst., 96, 154935c (1982).

13- M. Masuda, T. Satoh, M. Handa, Y. Itoh and K. Sagara, Bunseki  Kagaku, 46, 10, 777-783 (1997); (Abstract).

14- G. R. Rao, S. Raghuveer and P. Khadgapathi, Indian Drugs, 25, 3, 125- 127 (1987); Chem. Abst., 109, 27663z (1988).

15- R. Canals and J. M. Caldero, Afinidad, 37, 369, 435-438 (1980); Chem. Abst., 94, 145452z (1981).

16- J. Dobrecky and B. Gonzalez, Rev. Farm., 116, 7-9, 60-62 (1974);  Chem. Abst., 83, 157644z (1975).

17-J. Schmid and F. W. Koss, J. Chromatogr., 227, 1, 71-81 (1982); Chem. Abst., 96, 96987h (1982).

18- M. Johansson and S. Lenngren, J. Chromatogr., 432, 243-252 (1988);  Chem. Abst., 110, 163v (1989).