تنقية الفوسفاتير الحامضي Purification of acid phosphatase

استعملت طرق مختلفة لتنقية الأنزيم ومن مصادر مختلفة وباستعمال تقنيات عديدة منها القصل الغشائي (Dialysis)، التركيز بواسطة الأملاح وطرفي الكروموتوغرافيا المختلفة.

تمكن Uehara من تنقية الفوسفاتير الحامضي ١٥٠٠ مرة من عصارة البطاطا الحلوة الناضجة ، وبإجراء عملية الترحيل الكهربائي للأنزيم المنقى وجد بأنه يرحل بشكل حزمة مفردة باستعمال هلام تعدد الأكزيل أما يد (Polyacrylamide). أما Scott فقد نجح في تنقية الأنزيم من كريات الدم الحمر وذلك بمعاملتها بمحلول (6%  Butanol15 % ,chloroform) وبدرجة ٤ ْم. وقد وجد أن الأنزيم المنقى له فعالية نوعية تساوي 0.0076  وحدة / ملغم بروتين.

كما تم تنقية 54.40 ملغم من الفوسفاتير الحامض البروستاتي من ٤١٩٠٧ سم3 من سائل منوى لمجموعة من الأشخاص الأصحاء وذلك بتركيد بروتسنات الراشح بكبريتات الأمونيوم بتركيز 80% ، وإجراء عملية الفصل الغشائي للراسب لعدة يوم كام ، إذ يمكن بعدها إكمال عمليا الفصل بصورة نقية باستخدام طرق الكروموتوغرافيا الحساسة (التالفي ، التبادل الأيوني والترشيح الهلامي). ويعد الــ PAP المنقى من السائل المنوي مناعياً وكيميائياً مشابهاً للإنزيم المنقى من غدة البروستات.

وتختلف درجة التنقية لــ PAP المنقى من نسيج غدة البروستات باختلاف نوع الورم الذي يصيب النسيج ، فقد تم تنقية الانزيم (١٣٤) مرة من النسيج المصاب بــ (NPH) و (٧٦) مرة من النسيج المصاب يورم خبيث ، وعلى الرغم من الاختلاف في درجة التنقية إلا إنه لا يوجد فرق في الصفات الحركية مثل قيمة ثابت ميكالس - منتن (Km) ، قيمة الأس الهدروجيني الأعظم، الاستقرار الحراري ، ودراسات التثبيط بين الإنزيمين المنقيين.

كما تم تنقية الأنزيم ٢٠٠٠٠ مرة من عظام الإنسان و ٢٣٠٠ مرة من غشاء غدة الثايموس للخنزير باستعمالي (- 100 Trution X) ومن فطر Candida lipolytica نقى الأنزيم (111) مرة.