عزل وزراعة المُستأصل النباتي

يتم عزل ونقل المُستأصل النباتي إلى بيئة النمو بعد تعقيمه داخل كابينة الزراعة Laminar flow hood والتي يجب أن تعقم بالكحول قبل بدء العمل وتركها لمدة 15 دقيقة حتى نضمن أن الهواء الموجود في حيز العمل قد تغير بهواء معقم. وإن كانت الكابينة مزودة بلمبات UV فينصح بتركها مضاءة لمدة نصف ساعة قبل العمل في الكابينة لتعقيمها على ألا يستأنف العمل في الكابينة إلا بعد حوالي نصف ساعة. وبعد معاملة النسيج بالمحلول المعقم وغسله عدة مرات بالماء المقطر المعقم داخل كابينة التعقيم يتم وضعه على سطح معقم كطبق بترى ويفضل وضع ورقة ترشيح معقمة ومبللة بالماء في الطبق للمحافظة على رطوبة النسيج والشفرات المستعملة في تقسيم المُستأصل النباتي. وفي حالة الأنسجة الوعائية كالسوق يتم إزالة الجزء الطرفي الملامس لمحلول التعقيم والذي تغير لونه لأنها تموت غالباً ، ثم يقطع المُستأصل النباتي ويتم ذلك باستعمال آلة حادة مثل المشرط الجراحي أو أجهزة ثقب خاصة ذات أقطار مختلفة حسب الحاجة.

يجب توخي الدقة في جعل الأجزاء المفصولة ذات أحجام متساوية بقدر الإمكان. وعند فصل القمم الميرستيمية يستعمل مجهر ذو قوة تكبير منخفضة للمساعدة في عملية الفصل. وبعد ذلك ينقل الجزء المفصول إلى وعاء الزراعة وتختلف طريقة وضع الجزء المنزرع، فالبذور توضع على سطح البيئة لتوفير الأكسجين الضروري للإنبات كذلك الأمر للقمم الميرستيمية. أما الأجزاء كبيرة الحجم مثل العقل الساقية فيمكن وضعها أفقيا على سطح البيئة، أو غمس الجزء القاعدي منها في البيئة. في حين أن الأجزاء الرهيفة كأجزاء الأوراق يتم الضغط عليها برفق أثناء وضعها حتى يتم التلامس التام بينها وبين البيئة.

وتعتبر مهارة القائم بعملية صب البيئة في أواني الزراعة وإعداد ونقل الجزء المنزرع إلى المزرعة من العوامل الهامة جدا في الحد من التلوث. فالفني الماهر قد يستطيع إجراء هذه العملية بدون حدوث تلوث نهائي أو حدوثه بنسبة منخفضة. ومن الضروري الأخذ في الاعتبار بعض الاحتياطيات العامة للحد من التلوث ومنها:

* غسيل الأيدي بالماء والصابون جيداً قبل العمل ويمكن مسح الأيدي بالكحول مع ملاحظة أن الكحول يؤدى إلى جفاف الجلد.

* لبس قناع الوجه عند العمل.

* ملاحظة الجلوس أبعد ما يمكن عن كابينة التعقيم وعدم إدخال الرأس داخلها بأي حال من الأحوال.

* المحافظة بقدر الإمكان على الأيدي والساعدين غير ملامسين للكابينة.

* الاستدارة للخلف في حالة العطس أو الكحة.

* يجب بقدر الإمكان حمل أوعية الزراعة في وضع أفقي أثناء نقل الأجزاء المزروعة إليها لتقليل التلوث.

* عدم وضع المزيد من الأدوات الأخرى وأواني الزراعة داخل الكابينة حتى لا تعوق حركة الهواء خاصة في حالة الوحدات ذات الدفع الأفقي للهواء.

* توضع الأدوات بترتيب استعمالها حتى لا نضطر لتحريكها فوق بعضها البعض.

* عدم تمرير الأيدي أو أي أدوات فوق المزرعة إذا كانت الأوعية المحتوية عليها مفتوحة.

* الحرص الشديد بعدم ملامسة اليد لفوهة الوعاء أثناء نقل المزرعة من وعاء لآخر.