المبدأ الاساسي  Basic Principle

تم تقديرفعالية إنزيم  كلوتاميت-بايروفيت ترانس امينيز باستخدام طريقة إنزيمية تعتمد على قياس بايروفيت هيدرازون (Pyruvate hydrazone) المتكون من تفاعل البايروفيت الناتج  من عملية نقل مجموعة الامين (Transamination) بوجود الإنزيم  GPT مع , 2 4 ثنائي نايتروفنيل هيدرازين.⁽¹⁾  

الكواشف Reagents

  -1المحلول المنظم Buffer Solution  :- يحتوي هذا المحلول على الفوسفات المنظم (Phosphate buffer)  بتركيز (100) mmolL  وعند اس هيدروجيني (pH = 7.4) ، والالنين (L-alanine) بتركيز mmolL (200) ويحتوي ايضاً على الفا- كيتوكلوتاريت (α-ketoglutarate) بتركيز mmolL (2)  .

 -2 محلول الكاشف 2،4-ثنائي نايتروفنيل هيدرازين (2.4-Dinitro phenyl hydrazine) بتركيز mmolL(2) ، ويكون جاهزاً للاستخدام ومستقراً عند خزنه بدرجة °C 2)-(8 .

-3 محلول هيدروكسيد الصوديوم (Sodium hydroxide) بتركيز (4) molL  ، يخفف محتوى علبة واحدة من الكاشف بالماء المقطر إلى ml (1000) ويبقى المحلول مستقراً بدرجة حرارة°C 2)-(8.

طريقة العمل Procedure

اضيفت ml (0.1)  من الماء المقطر  ومصل الدم  الى انابيب اختبار تحتوي (0.5) ml  من المحلول المنظم مع الرج . ووضعت الانابيب  في الحمام المائي بدرجة حرارة°C   (37) ولمدة  (30) دقيقة، بعدها يضاف لكل انبوبة (0.5) ml  من المحلول 2,4 - ثنائي نايتروفنيل هيدرازين وترج الانابيب وتترك بدرجة حرارة °C 20)-(25  ولمدة  (20) دقيقة . ثم يضاف لكل انبوبة (5) ml  من محلول هيدروكسيد الصوديوم . وتمزج وتترك لمدة  (5) دقائق بعد ذلك تقرأ الامتصاصية عند طول موجي قدره nm  (546) .

الحسابات Calculations

يتم الحصول على فعالية إنزيم  الـ GPT  من الشكل الاتي : 

-------------------------------------------------

1.  Reitman  S., and Frankel  S. (1957)," A calorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic acid and glutamic pyruvic transaminases " , J. Clin. Path. 28:56.