A/اختبار اليوريز بطريقة كرستنسن Urease Test (Christensen's Method)

الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار لتحديد قابلية البكتيريا على انتاج انزيم اليوريز Urease الذي يحلل اليوريا مائيا. تشخص بكتيريا .Proteus sp بوساطة قدرتها السريعة على تحلل اليوريا مائيا.

مبدأ الاختبار Principle

تنتج اليوريا من نزع الكاربوكسيل decarboxylation من الاحماض الامينية، وتحلل اليوريا مائيا ينتج أمونيا و CO2 . ان انتاج الامونيا يجعل الوسط قاعديا، ويكشف عنه بوساطة الأس الهيدروجيني وتغير لون احمر الفينول Phenol red من البرتقالي الخفيف في (PH 6.8) الى اللون الاحمر المائل للارجواني (وردي) في( 8.1 pH).

البكتيريا الموجبة السريعة لاختبار اليوريز تحول الوسط الى اللون الوردي خلال (24) ساعة . اما الموجبة الضعيفة قد تحتاج عدة ايام والسالبة لا تنتج لونا أو لونا اصفر كنتيجة لانتاج الحامض

الوسط Media

اذابة (1غم ) جيلاتين مهضوم انزیمیا Enzymatic digest of gelatin (1غم) دكستروز dextrose ، (5غم) كلوريد الصوديوم Nacl ،( 2غم ) فوسفات البوتاسيوم ثنائي الهيدروجين KH2PO4 ,( 20غم ) يوريا Urea ،  (0.012 ) احمر الفينول phenol red في كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى 6,8 ثم يكمل الحجم الى 1000 مل ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند/ انج² لمدة 15 دقيقة ثم وزع في انابيب. (ملاحظة يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم )

طريقة العمل Method

1 - يلقح سطح اليوريا المائل بطريقة التخطيط بجزء من مستعمرة معزولة نقية، او يلقح سطح الوسط المائل بإضافة ( 1- 2 ) قطرة من مزرعة بكتيرية نامية في سط نقيع الدماغ والقلب السائل المحضونة لليلة كاملة.

 2- تحضن بدرجة حرارة (35 - 37 ) م في ظروف هوائية لمدة (48 ) ساعة الى (7) ايام . مع بقاء غطاء الانبوب مفتوح قليلا (غير محكم الغلق )

النتائج المتوقعة Expected Results

 * النتيجة الموجبة : تغير لون سطح الوسط المائل من البرتقالي الخفيف الى الوردي الشكل (A).

 * النتيجة السالبة : عدم تغير اللون (سطح) الوسط المائل والقعر تبقى ذات لون برتقالي خفيف . الشكل (B ) .

الملاحظات :

1- تظهر التفاعلات القاعدية بعد مدة طويلة من الحضن والتي تنتج من استهلاك الببتون او البروتينات الاخرى التي تؤدي الى رفع الاس الهيدروجين الذي يعطي تفاعلا موجبا خاطئا.

 2- تلغى النتيجة الموجبة الخاطئة باستعمال انبوب يحتوي مادة الوسط الاساسية بدون اليوريا.

B /اختبار اليوريز بطريقة رستكيانوستاوارت Rustigian and Stuart's Urea Broth

الوسط Media

اذابة (0.1غم)  من خلاصة الخميرة ، ( 9.1 غم ) فوسفات البوتاسيوم Potassium phosphate , mono basic  ,  (9.5غم) فوسفات البوتاسيوم Potassium phosphate ،  dibasic،  ( 20غم)  يوريا Urea , ( 0.01غم) احمر الفينول Phenol red , كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى 6,8 ثم يكمل الحجم الى 1000 مل ويوزع في انابيب ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند/ انج² لمدة 15 دقيقة ثم وزع في انابيب وتترك بدرجة 25م. . (ملاحظة. يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم )

طريقة العمل Method

1- تؤخذ انابيب تحوي الوسط السائل لليوريا

 2- تلقح الانابيب بكمية من البكتيريا (كثيفة). وعدم تلقيح انبوبة السيطرة.

3 - حضن الانابيب بظروف هوائية بدرجة حرارة ( 35 ) م لمدة (24 ) ساعة.

النتائج المتوقعة Expected Results

* النتيجة الموجبة : تغير في اللون من البرتقالي الخفيف الى الوردي. الشكل ( A ) .

* النتيجة السالبة : عدم تغير اللون تبقى ذات لون برتقالي خفيف الشكل (C).