الغرض من الاختبار Purpose

انتاج انزيم Gelatinase الذي له القدرة على تحلل الجلاتين ويستعمل كاختبار تخميني للتعرف على انواع من البكتيريا بضمنها . sp Staphylococcus Enterobacteriaceae ,   ، وبعض العصويات الموجبة لصبغة كرام.

مبدأ الاختبار Principle

يستعمل هذا الاختبار في تحديد قابلية البكتيريا على انتاج انزيمات هاضمة للبروتين الخارج خلوية extracellular proteolytic enzymes

الجيلاتينيز (gelatinases) التي تعمل على اسالة الجيلاتين الذي يعد من مكونات النسيج الضام للفقريات . الوسط الجيلاتين الغذائي يختلف عن الأوساط الغذائية المستعملة في علم الاحياء المجهرية الحاوية على مادة التصلب الاكار وذلك باحتوائه على الجيلاتين ، اذ ان انتاج البكتيريا للجيلاتنيز يعمل على اسالة (يميع) وسط النمو.

الوسط الزرعي Media

اذابة (5غم) جيلاتين محلل انزیمیاً Enzymatic digest of gelatin , (3غم) خلاصة اللحم البقري  Beef extract ,( 120غم ) جيلاتين gelatin في كمية من الماء المقطر ويعدل الأس الهيدروجيني الى 6.8ثم يكمل الحجم الي 1000 مل ، ثم تعقم بجهاز الموصدة (Autoclave ) بدرجة 121م وبضغط 15 باوند /انج² لمدة 15 دقيقة ثم توزع في انابيب ( ملاحظة يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم ).

طريقة العمل Method

1- تلقح انابيب الجيلاتين بـ (4-5 قطرات ) من مزرعة سائلة بعمر (24 ساعة)، أو يلقح وسط الجلاتين من مزرعة بعمر 24 ساعة بواسطة الطعن Stabbing من ( 4-5 مرات ) بعمق (0٫5 انج).

 2- تحضن الانابيب بدرجة (35-37) م بظروف هوائية لمدة تصل الى (14 يوم).

3- توضع انابيب الجيلاتين بعد الحضن في درجة (4) م لاختبار التميع، مع عدم قلب الانبوب او عكسها لان في بعض الاحيان يكون التميع واضح فقط في اعلى منطقة التلقيح.

4- تبرد انابيب الجيلاتين غير الملقحة بالبكتيريا (انابيب السيطرة) مع انابيب الملقحة  , التميع يحدد فقط بعد تصلب الجيلاتين في انابيب السيطرة.

النتائج المتوقعة Expected Results

النتيجة الموجبة : التميع الجزئي او الكلي ( انابيب السيطرة يجب ان يكون متصلب كليا ) في درجة (4)م لمدة 14 يوم. الشكل (23-A).

النتيجة السالبة : التصلب الكلي للوسط في درجة (4) م . الشكل (23- B ) .

الملاحظات :

1- بعض انواع البكتيريا قد تكون ضعيفة النمو او لا تنمو نهائيا في هذا الوسط.

2- الجيلاتين سائل بدرجة حرارة فوق (20) م ، لذلك يجب ان تكون النتائج بعد التبريد.

3- يحضن الوسط بدرجة 25م للبكتريا التي تفضل النمو في هذه الدرجة بدلا عن درجة (35)م.