المبدأ الأساسي  Basic Principle

ان الناتج اللوني ) الكروموفور Chromophor ) يتكون بواسطة الفيوكوز في وسط حامضي قوي (حامض الكبريتيك) , وبوجود السستين Cysteine . وان هذا الناتج الملون يقاس عند طولين موجيين (396 , 430) nm ⁽¹⁾. ان الفرق في الاطوال الموجية يمثل تركيز البروتين المرتبط بالفيوكوز.

الكواشف Reagents

-1 ايثانول بتركيز 95%

-2 محلول هيدروكسيد الصوديوم NaOH  بتركيز (0.1 N) .

 -3محلول حامض الكبريتيك  H₂SO₄ :- ستة اجزاء حامض الكبريتيك + جزء واحد ماء مقطر .

 -4محلول هيدروكلوريد السستين  Cystein hydrochloride:- بتركيز 3%  يحضر اسبوعيا ويخزن في الثلاجة .

-5المحلول القياسي للفيوكوز Standard  بتركيز(10)mgdl.

طريقة العمل Procedure 

اضيف (1) ml  من الايثانول الى  ml (0.1) من مصل الدم , لترسيب البروتين . ووضع في جهاز الطرد المركزي لمدة (20) دقيقة وبسرعة (3000) r.p.m  لاعطاء محلول نقي . ويؤخذ الراسب ويغسل مع (1)ml من الايثانول ويوضع مرة اخرى بجهاز الطرد المركزي . ويتم اضافة(3)ml  من محلول (0.1)N هيدروكسيد الصوديوم NaOH لاذابة الراسب , ويوضع (1)ml من المحلول الأخير في أنبوبتي اختبار ومن ثم يضاف (4.5)ml  من محلول حامض الكبريتيك بشكل تدريجي مع الرج المستمر في حمام ثلجي ( لتجنب الارتفاع المفاجئ لدرجات الحرارة ) ومن ثم وضعت الأنابيب في حمام مائي وبدرجة حرارة الغرفة لمدة (3) دقائق , ونقلت الأنابيب الى حمام مائي مغلي لمدة (10) دقائق . وبعد ترك الأنابيب لمدة (10) دقائق لتبرد , تم إضافة (0.1) ml من هيدروكلوريد السستين لاحدى الانبوبتين بينما يضاف للأنبوبة الثانية ماء مقطر , وترك المزيج لمدة ساعتين وتم قياس الامتصاصية في طولين موحيين nm  396) و(430⁽¹⁾

الحسابات Calculation

يحسب مستوى تركيز الفيوكوز المرتبط بالبروتين في مصل الدم بوحدة ( mgdl) وفق القانون الآتي:-

A_x =الامتصاصية للنموذج المرتبط مع السستين

A_y = الامتصاصية للنموذج غير مرتبط مع السستين

A_st =الامتصاصية للمحلول القياسي مع السستين

 =  12معامل التخفيف

-----------------------------------------------------------------------

1. Dische  Z.,Shettles   L.B., and Osnos  M.(1951),"Neutral  mucopolysac-  charide  of  the  human  cervical  mucus" , j. Biol. Chem. 192:589-593.