الميكروبات غير القابلة للزرع Unculturable Microorganisms

الاحياء التي لا تستطيع النمو على الاوساط المختبرية اي خارج الانظمة الحية In vitro ، وهذا يمكن ان يؤدي الى عدم معرفة دورها في النظام البيئي او توليد الامراض . فالبكتريا المزروعة في المختبرات لا تشكل الا حوالي 1% من البكتريا الموجودة على الارض ، والمعروف اليوم ان هناك حوالي اكثر من 60 شعبة من البكتريا حوالي نصفها غير قابلة للزرع ، وهذا يعود الى عدة اسباب منها : قلة شيوع هذه الاحياء ، او بطيء نموها ، او قد تكون متشابهة مظهريا مع غيرها لذا لا يمكن تمييزها وكذلك تداخلها مع غيرها في الفحوص الكيماوية – الحيوية ، وقد تكون الاحياء ذات متطلبات خاصة أي انها تحتاج الى متطلبات غذائية خاصة ، فضلا عن تدخل ظروف اخرى مثل الارقام الهيدروجينية ودرجات الحرارة المستعملة في الحضن ومستوى الاوكسجين في البيئة المحيطة ، والمنافسة مع الاحياء الاخرى ، اذ يمكن قتلها بالبكتريوسينات او المواد الاخرى القاتلة التي تنتجها الاحياء المرافقة من الاحياء سريعة النمو ، وربما احتاجت هذه الاحياء الى Cross Feeding او تعاون ايضي من احياء اخرى كما يحدث في تعاون مكونات بواديء اللبن ، او ان البكتريا تحتاج الى Cytokines مثل Bacterial Cytokines من احياء اخرى ، او الحاجـــــــــــــة الى انزيمات خاصة مثل حاجة Bacillus subtilis الى EC 2.7.11.1) Serine/Threonine Protein Kinase) للانبات .
وفضلا عن ما ذكر فان جزيئات الاشارة الموجودة في البيئة التي تشجع نمو الاحياء المجهرية لا توجد في الاوساط الزرعية المختبرية ، لذلك تدخل البكتريا مثلا حالة الايض المنخفض وتبقى حية ولكن لا تنمو ولا تكون المستعمرات . وقد تظافرت الجهود لحل هذا الوضع ومنها استعمال اوساط غنية او اغناء النماذج لابعاد الاحياء المنافسة ، واطالة مدة الحضن للسماح للاحياء بطيئة النمو مثل اطالة مدة الحضن الى 24 اسبوع . وكذلك استعمال طرق الزراعة المرافقة Co-Culture أي استعمال سلالات مساعدة Helper Strains تفرز مواد تحفز نمو الاحياء الاخرى حتى في غيابها أي يمكن استعمال راشح نمو الاحياء المساعدة في تركيبة الاوساط للاحياء غير القابلة للزرع كما في استعمال الاوساط المكيفة Conditional Media .

وقد تكون الحالة ناتجة عن نقص جزيئات الاشارة مثل cAMP او Acyl Homoserine او Lactones ، فاضافة 10 مايكرومول من cAMP الى الوسط الغذائي سمح لعدد كبير من البكتريا البحرية بالنمو .
والمحاولات الاخرى هو استعمال المصادر الطبيعية في بيئة الاحياء المجهرية في تحضير الاوساط الغذائية أي محاكاة بيئتها مثل استعمال ماء البحر المعقم بالترشيح ، او استعمال التربة المغطاة باغشية ناضحة لتنمية الاحياء عليها . اما البكتريا التي تتطفل داخل الخلايا حقيقية النواة فيمكن محاكاتها من حيث المحاليل المنظمة المستعملة و الارقام الهيدروجينية . وفي حالة فشل كل هذه المحاولات عندها يمكن اللجوء الى الطرق الجزيئية التي لا تحتاج الى الزراعة .