المبدأ الأساسي Basic Principle
ان الناتج اللوني ) الكروموفور Chromophor ) يتكون بواسطة الفيوكوز في وسط حامضي قوي (حامض الكبريتيك) , وبوجود السستين Cysteine . وان هذا الناتج الملون يقاس عند طولين موجيين (396 , 430) nm (1). ان الفرق في الاطوال الموجية يمثل تركيز البروتين المرتبط بالفيوكوز.
الكواشف Reagents
-1 ايثانول بتركيز 95%
-2 محلول هيدروكسيد الصوديوم NaOH بتركيز (0.1 N) .
-3محلول حامض الكبريتيك H2SO4 :- ستة اجزاء حامض الكبريتيك + جزء واحد ماء مقطر .
-4محلول هيدروكلوريد السستين Cystein hydrochloride:- بتركيز 3% يحضر اسبوعيا ويخزن في الثلاجة .
-5المحلول القياسي للفيوكوز Standard بتركيز(10)mgdl.
طريقة العمل Procedure
اضيف (1) ml من الايثانول الى ml (0.1) من مصل الدم , لترسيب البروتين . ووضع في جهاز الطرد المركزي لمدة (20) دقيقة وبسرعة (3000) r.p.m لاعطاء محلول نقي . ويؤخذ الراسب ويغسل مع (1)ml من الايثانول ويوضع مرة اخرى بجهاز الطرد المركزي . ويتم اضافة(3)ml من محلول (0.1)N هيدروكسيد الصوديوم NaOH لاذابة الراسب , ويوضع (1)ml من المحلول الأخير في أنبوبتي اختبار ومن ثم يضاف (4.5)ml من محلول حامض الكبريتيك بشكل تدريجي مع الرج المستمر في حمام ثلجي ( لتجنب الارتفاع المفاجئ لدرجات الحرارة ) ومن ثم وضعت الأنابيب في حمام مائي وبدرجة حرارة الغرفة لمدة (3) دقائق , ونقلت الأنابيب الى حمام مائي مغلي لمدة (10) دقائق . وبعد ترك الأنابيب لمدة (10) دقائق لتبرد , تم إضافة (0.1) ml من هيدروكلوريد السستين لاحدى الانبوبتين بينما يضاف للأنبوبة الثانية ماء مقطر , وترك المزيج لمدة ساعتين وتم قياس الامتصاصية في طولين موحيين nm 396) و(430(1)
الحسابات Calculation
يحسب مستوى تركيز الفيوكوز المرتبط بالبروتين في مصل الدم بوحدة ( mgdl) وفق القانون الآتي:-
Ax =الامتصاصية للنموذج المرتبط مع السستين
Ay = الامتصاصية للنموذج غير مرتبط مع السستين
Ast =الامتصاصية للمحلول القياسي مع السستين
= 12معامل التخفيف
-----------------------------------------------------------------------
1. Dische Z.,Shettles L.B., and Osnos M.(1951),"Neutral mucopolysac- charide of the human cervical mucus" , j. Biol. Chem. 192:589-593.
