طريقة خاصة أو تحويرية لكروماتوغرافيا الإمتزاز حيث تعتمد هذه التقنية على وجود ميل أو ألفة بين الطور الثابت وبين المركب المراد فصله في الطور المتحرك فمثلاً عند إضافة مستضد Antigen علــى العمود وتمرير المضاد Antibody طوراً متحركاً على العمود سوف يرتبط معه فقط ومن ثم يمكن إجراء عملية فصل المركبين من العمود باستخدام محلول منظم ذو pH معين في هذا النوع من الفصل، هناك نوع خاص من التجاذب ليس بين الشحنات وإنما تداخل أو ألفة بين المركبات. وهذه الطريقة تعد من الطرائق الهامة لتنقية الإنزيمات إذ يحدث فيها ارتباط نوعي بين مادة التفاعل أو المثبط التنافسي، ونتيجة لذلك يحدث ارتباط تساهمي مع الطور الثابت (الصلب) الحامل (مثل الأكاروز (Agarose) وعند مرور المخلوط خــلال أنظمة الفصل التي تحتوي على الطور الثابت فإنه لا يسمح بمرور الإنزيم المطلوب بينما يسمح للإنزيمات الأخرى والبروتينات بالخروج من العمود، ويمكن استخلاص الإنزيم المرتبط بإحداث تغيير في الـ pH أو بتغيير القوة الأيونية في المحلول وبهذه الطريقة يضعف ارتباط الإنزيم في أعمدة الفصل ويمكن توضيح ذلك بالشكل (11-13).

وباستخدام هذه الطريقة يمكن تنقية الإنزيمات في خطوة واحدة من المستخلص الخام. وهناك العديد من الإنزيمات التي أمكن تنقيتها بهذه الطريقة مثل إنزيم نيوكليز Nuclease من بكتريا المكورات العنقودية Staphylococcus

وتواجه تنقية الإنزيمات بطريقة كروماتوغرافيا الألفة العديد من الصعوبات مثل:

 1- قد يكون من الصعوبة أتمام الارتباط مع مادة التفاعل المناسبة إذ ان التفاعلات التي لها علاقة بالارتباط لا يمكن وصفها وصفاً كاملاً.

2 تكوين الرابطة مع الطور الصلب يمكن ان تسبب في حدوث تداخل مع المجموعات الجانبية للإنزيم وتؤدي الى فقدان النشاط عند حدوث الارتباط.

3- يجب ان تكون قوة ارتباط الطور الصلب والإنزيم في المدى الصحيح.

4- تعد المشكلات الخاصة والمتعلقة بالإنزيم أكثر أهمية من مادة التفاعل بمفردها. ولهذا فإن المتوقع أن كل إنزيمات الديهيدروجنيز Dehydrogenases تعتمد على ⁺NAD وبالتالي يجب معرفة ان الارتباط يؤدي الى تكوين NAD⁺  matrix bound والاختلاف بين الديهيدروجنيز يكون في المجموعات الجانبية يكون ارتباطها ثانوياً مع مادة التفاعل ويجب ملاحظة ذلك أثناء حدوث الإزاحة في العمود.

ورغم وجود هذه الصعوبات إلا أن هذه التقنية تساهم في تنقية الإنزيمات والجزيئات البيولوجية الأخرى مثل الأجسام المضادة. ويمكن استعمال هذه التقنية تقريباً على أي زوج من الجزيئات متحد بشكل معكوس مع أكثر

التطبيقات العمومية تأتي من المجاميع الآتية:

1- المضاد - المستضد Antigen - antibody

2 - المثبط أو مادة الأساس – الإنزيم.

3- البروتين المرتبط - الهورمون.

4- الأحماض النووية - متممة التسلسل Nucleic acid - complementary sequence

مواضيع ذات صلة

كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي Gel- filtration chromatography

كروماتوغرافيا السائل ذو الضغط العالي (High pressure liquid chromatography (HPLC

كروماتوغرافيا الغاز Gas chromatography

كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (Thin- layer chromatography (TLC

كروماتوغرافيا الورقة Paper chromatography

كروماتوغرافيا التبادل الأيوني Ion- exchange chromatography

كروماتوغرافيا الإمتزاز Adsorption chromatography

تطبيقات الكروماتوغرافيا

الكروماتوغرافيا Chromatography

المجاميع الباعثة للفلورة (الفلوروفورات) (Fluorescent groups (Fluorophores

Acid-base extraction

LIQUID–LIQUID EXTRACTION