1- المبدأ Principle
تم استخدام الطريقة الطيفية (Reitman and Frankel, 1957) التي تعتمد على قياس تركيز البايروفيت هايدرازون (Pyruvate hydrazone) المتكون من تفاعل البايروفيت مع 2،4-ثنائي نايتروفنيل هيدرازين المضاف حسب المعادلات التالية :-
تقاس شدة اللون بجهاز المطياف الضوئي عند طول موجي (540 nm) نانومتر مقابل محلول الكفء.
2- تحضير الكواشف Preparation of Reagents
1. محلول (GPT) المنظم (GPT Buffer) يتكون من (100) ملي مول/ لتر محلول الفوسفات المنظم عند دالة حامضية (7.4 = PH) و (200) ملي مول/ لتر حامض الالانين (L- Alanin) و (2) ملي مول/ لتر الفا- اوكسوكلوتاريت (a-Oxoglutarate )
2. محلول 2،4- ثنائي نايتروفينل هيدرازين (2,4- D. N. P. H.) الذي يكون بتركيز (2) ملي مول/ لتر.
3. محلول هيدروكسيد الصوديوم بتركيز (4.0) مول/ لتر.
3- طريقة العمل Procedure
1. محلول الاختبار Test Solution
وضع (0.5) مليلتر من محلول GPT المنظم في أنبوبة اختبار ثم أضيف إليها (0.1) مليلتر من مصل الدم مع الرج.
2. محلول السيطرة Control Solution
وضع (0.5) مليلتراً من محلول GPT المنظم في أنبوبة اختبار ثانية ثم أضيف إليها (0.1) مليلتر من الماء المقطر مع الرج. بعد ذلك ، التحضين لمدة (30) دقيقة عند (37°م) في الحمام المائي ثم أضيف (0.5) مليلتر من محلول (2,4 D. N. P. H) لكل أنبوبة مع الرج ، الانتظار لمدة (20) دقيقة عند درجة (20°م) ، تتبع بإضافة (5) مليلتراً (NaOH) لكل أنبوبة مع الرج وبعد الانتظار لمدة (15) دقيقة تقاس الامتصاصية عند طول موجي مقداره (nm 540) نانومتر.
4- الحسابات Calculation
بعد الحصول على قيم الامتصاصية لكل من محلول الاختبار ومحلول السيطرة نطبق العلاقة التالية (الامتصاصيةABS = امتصاصية محلول الاختبار- امتصاصية محلول السيطرة).
تقارن الامتصاصية (ABS) الناتجة من العلاقة أعلاه مع الجدول التالي لاستخراج قيم فعالية إنزيم (GPT):-
