Cassette Mutagenesis

 Cassette mutagenesis involves replacing a wild-type DNA sequence with synthetic double-stranded oligonucleotides in order to introduce one or more mutations (1-6). The technique allows saturation of a target amino acid codon with mutations, and can be used to probe the role of that particular residue in a protein and the effect of specific point mutations in it. In their description of the method, Wells et al. (4) synthesized single-stranded oligonucleotides containing different codons over the target in separate pools. Oligonucleotide-site-directed mutagenesis procedures are used to generate restriction sites that closely flank the target codon in the plasmid containing the gene of interest. Use of the appropriate restriction endonucleases permits insertion of the synthetic duplex cassettes. These are designed to restore fully the wild-type coding sequence except over the target codon, and also to eliminate one of the restriction sites. This latter point is important for selection of the clones containing the mutant cassette. Several variations on the original technique have been developed for specific purposes. For example, Reidhaar-Olsen and Sauer (5) described a combinatorial method, in which they randomized two or three positions by oligonucleotide cassette mutagenesis, selected for functional protein and then sequenced to determine the spectrum of allowable substitutions at each position. They applied the method repeatedly in order to examine the role of different substitutions on the DNA-binding domain of lambda repressor. Kegler-Ebo et al. (6) described codon cassette mutagenesis as a way of depositing single codons at specific sites in double-stranded DNA. Using this method, a series of 11 cassettes is sufficient to insert all possible amino acids at any constructed target site.

References

1. S. Green (1955) Mutat. Res. 333, 101–109. 

2. M. D. Matteuci and H. L. Heyneker (1983) Nucleic Acids Res. 11, 3113–3121. 

3. J. B. McNeil and M. Smith (1985) Mol. Cell. Biol. 5, 3545–3551. 

4. J. A. Wells, M. Vasser, and D. B. Powers (1985) Gene 34, 315–323. 

5.   J. F. Reidhaar-Olsen and R. T. Sauer (1988) Science 241, 53–57. 

6. D. M. Kegler-Ebo, G. W. Polack, and D. DiMaio (1994) Methods Mol. Biol. 57, 297–310.

اخر الاخبار

اخبار العتبة العباسية المقدسة

مجموعة العميد التربوية تعقد اجتماعًا لمناقشة الاستعدادات الخاصة بالموسم التدريبي الصيفي

قسم الإعلام ينظم ورشة تدريبية حول تطبيق (إعلامي) لعدد من منتسبي قسم حفظ النظام

قسم الشؤون الخدمية ينفذ حملة لتنظيف الشوارع المحيطة بصحن مرقد أبي الفضل العباس (عليه السلام)

وفد العتبة العباسية المقدسة يزور شعبة الإعداد البدني للاطّلاع على برنامج تأهيل المنتسبين الجدد

المزيد

الآخبار الصحية

ماذا يحدث إذا تناولنا الطعام مرة واحدة فقط في اليوم

اكتشاف عوامل خطر غير متوقعة لمرض الكبد الدهني

فيروس هانتا والسفينة الموبوءة.. تحديث من الصحة العالمية

طبيب يحسم الجدل السجائر الإلكترونية وعلاقتها بالسرطان

المزيد

الآخبار التكنلوجية

لأول مرة في الولايات المتحدة.. تشغيل مفاعل مصغر نووي يغذي الذكاء الاصطناعي بالطاقة

الكشف عن تفاصيل أول عملية ناجحة لاستعادة انتاج الحيوانات المنوية

أطلس يكشف خفايا الجسم البشري بدقة أرفع بـ50 مرة من شعر الإنسان

المتحف المصري الكبير يتحول إلى "أيقونة خضراء" بدعم ياباني

المزيد

مواضيع ذات صلة

Micro-RNAs Repress Translation and Induce Degradation of Specific mRNAs

Degradation of mRNAs in the Cytoplasm Occurs by Several Mechanisms

RNA Processing Solves the Problem of Pervasive Transcription of the Genome in Metazoans

Nuclear Exoribonucleases Degrade RNA That Is Processed Out of Pre-mRNAs

Microchip Electrophoresis

Electrophoresis of RNA

Pulsed-Field Gel Electrophoresis

3′ Cleavage and Polyadenylation of Pre-mRNAs Are Tightly Coupled

Self-Splicing Group II Introns Provide Clues to the Evolution of snRNAs

SR Proteins Contribute to Exon Definition in Long Pre-mRNAs

DNA Sequencing Gels

Nuclear Bodies Are Functionally Specialized Nuclear Domains